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本制品是一种新型的小核酸转染试剂。nFect可用来转染siRNA、miRNA mimics、miRNA inhibitor等200bp以内的小分子RNA，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。本制品适用于细胞株转染；对原代细胞转染，请选择nFect^PM小RNA转染试剂(货号：ME0002)；对悬浮细胞转染，请选购悬浮细胞小RNA转染试剂(货号：ME0003)

目前，转染试剂的主要成分均为脂质体或聚乙烯亚胺(PEI)，这两种成分都具有很大的细胞毒性，并且转染效果不好。nFect采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越的转染性能。与其它品牌的小核酸转染试剂相比，nFect的细胞转染阳性率一般在90%以上，Lamin A/C基因抑制效率在95%以上，而其它品牌转染试剂的细胞转染阳性率一般不超过70%，Lamin A/C基因抑制效率不超过75%。nFect细胞毒性很低，转染细胞死亡率不到10%，而其它品牌试剂的转染细胞死亡率一般在30%以上。血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。

• 细胞转染性能：细胞转染阳性率高达90%以上，基因敲除效果明显，A549细胞Lamin A/C基因敲除效率在95%以上；
  
• 极低的细胞毒性：转染细胞死亡率不到10%，大大降低了因细胞毒性对实验结果的影响；
  
• 转染细胞范围广，绝大多数贴壁细胞株都能获得比较理想的转染结果。

组分	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
nFect小RNA转染试剂	0.1mL	0.5mL	1mL	1.5mL
说明书	1份

保存：-20℃，避光，避免反复冻融，有效期1年。


本说明书适用于24孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。

• 细胞接种：
  转染前一天接种细胞，每孔500μL培养基，使细胞在转染时密度在30～50%，尽量不要使用抗生素。
  
• siRNA-nFect混合物准备：
  
  • 12pmol siRNA用50μL无血清培养基稀释。
    
  • 2μL nFect用50μL无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育5min。
    注意：确保在25min内执行第三步操作，不要过于延迟。
    
  • 孵育5min后，将siRNA稀释液与nFect稀释液混合（总体积100μL）。轻轻混匀，室温孵育20min。
• 将混合物加到培养的细胞内（完全培养基培养）：
  
  • 将100μL混合物加入培养孔内，培养孔内含有0.5mL培养的细胞。轻轻晃动培养板，混匀。
    
  • 37℃培养18-72h，检测基因抑制效果。如果需要，细胞培养4-6h时可以更换培养基，但不是必须。孵育时间的长短，取决于细胞类型、所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间。

• 转染实验优化：
  为了提高转染效率，建议对转染条件进行优化，特别是首次使用。例如：24孔培养板，siRNA用量在6、12、18、24、30pmol (f终浓度10～50nM)之间调整，nFect^SP试剂用量在1.0～3.0μL之间调整。
  
• 转染实验要点：
  
  • 转染过程尽量不要使用抗生素，否则会导致细胞死亡增加；
    
  • 首次实验siRNA的用量设置在终浓度10nM、20nM、30nM、40nM、50nM进行摸索，后续实验根据实验结果修改。

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